LPL Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421460-ACT

Il gene Lpl del topo codifica la lipoproteina lipasi (LPL), un enzima secreto che si lega all’eparan solfato e idrolizza i trigliceridi presenti nei chilomicroni e nelle VLDL circolanti, liberando acidi grassi destinati all’assorbimento da parte di tessuto adiposo, cuore e muscolo scheletrico. L’attività della LPL è coordinata da fattori endoteliali di trasporto e ancoraggio come GPIHBP1 ed è modulata da apolipoproteine e proteine angiopoietin-like, collegando lo stato nutrizionale alla ripartizione dei lipidi. Attraverso la regolazione dell’assorbimento e dell’immagazzinamento dei lipidi, la LPL contribuisce all’omeostasi energetica, alla biologia degli adipociti e alla sensibilità all’insulina; la sua disregolazione è associata a ipertrigliceridemia, steatosi epatica e fenotipi legati all’aterosclerosi in modelli di malattia metabolica. Queste caratteristiche rendono Lpl un nodo centrale per lo studio del metabolismo delle lipoproteine, della gestione vascolare dei lipidi e di vie metaboliche adiacenti all’infiammazione nei sistemi murini.

LPL Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Lpl senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LPL Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Lpl nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Lpl, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LPL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Lpl nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LPL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LPL nelle cellule tumorali con espressione di Lpl silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.