LOXL2 Plasmide Double Nickase (m): sc-430162-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LOXL2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LOXL2 Double Nickase Plasmid (m) e il LOXL2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Loxl2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LOXL2 Antibody (3C5): sc-293427
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LOXL2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430162-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Loxl2** codifica la lisil ossidasi-like 2 (LOXL2), un’ammina ossidasi rame-dipendente che catalizza la deaminazione ossidativa dei residui di lisina nel collagene e nell’elastina, promuovendo la reticolazione covalente e la maturazione della matrice extracellulare. Regolando la rigidità della matrice e l’organizzazione delle fibre collagene, LOXL2 influenza l’adesione e la migrazione cellulare e le vie di meccanotrasduzione, incluse la segnalazione integrina/FAK e i programmi trascrizionali associati all’EMT. Alterazioni dell’attività di LOXL2 sono state collegate al rimodellamento fibrotico e alla dinamica del microambiente tumorale, rendendola rilevante per studi sull’architettura tissutale, sulla biologia dell’invasione e sulle interazioni stroma–epitelio. Nei modelli murini, la perturbazione di **Loxl2** è comunemente utilizzata per chiarire come il rimodellamento della matrice extracellulare plasmi infiammazione, riparazione delle ferite e formazione della nicchia metastatica.
LOXL2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Loxl2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Loxl2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Loxl2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Loxl2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.