LNX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403866

Panoramica

PDZRN3 codifica LNX3, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING contenente domini PDZ, implicata nel controllo ubiquitina-dipendente della stabilità e del traffico delle proteine. Attraverso interazioni di scaffold mediate dai domini PDZ e l’attività di ubiquitinazione dipendente dal RING, LNX3 è in grado di regolare l’architettura delle reti di segnalazione alla membrana plasmatica e all’interno di compartimenti giunzionali o citoscheletrici, influenzando processi quali la polarità cellulare, la dinamica dell’adesione e i programmi di differenziamento. PDZRN3/LNX3 è stata collegata a vie coinvolte nel patterning dello sviluppo e nel rimodellamento tissutale, dove un’alterata segnalazione dell’ubiquitina può modificare gli output trascrizionali e le transizioni di stato cellulare. Una disregolazione dell’espressione di PDZRN3 o dell’ubiquitinazione mediata da LNX3 è stata riportata in contesti rilevanti per la malattia, inclusi un controllo anomalo della crescita e un rimodellamento fibrotico o infiammatorio, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla segnalazione e sulla proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LNX3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDZRN3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDZRN3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDZRN3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LNX3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDZRN3 per lo studio della segnalazione di LNX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDZRN3 critici per la funzione di LNX3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDZRN3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDZRN3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LNX3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LNX3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDZRN3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDZRN3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.