LMX1B Plasmide Double Nickase (h): sc-402945-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LMX1B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LMX1B Double Nickase Plasmid (h) e il LMX1B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LMX1B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LMX1B Antibody (1D12): sc-293262
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LMX1B Plasmide Double Nickase (h) | sc-402945-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LMX1B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402945-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMX1B codifica un fattore di trascrizione LIM-homeobox che regola la specificazione del destino cellulare e la patterning dei tessuti durante lo sviluppo, con ruoli di rilievo nella dorsalizzazione degli arti, nella differenziazione dei podociti renali e nell’identità di sottotipi neuronali. Attraverso interazioni con cofattori mediati dai domini LIM e il legame al DNA tramite il suo homeodominio, LMX1B coordina programmi trascrizionali che influenzano l’organizzazione della matrice extracellulare, la dinamica del citoscheletro e le reti di segnalazione dei morfogeni. L’alterazione genetica di LMX1B è collegata alla sindrome unghie-rotula ed è associata a disfunzione dei podociti e manifestazioni renali, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della regolazione genica dello sviluppo e della biologia glomerulare. Inoltre, l’espressione alterata di LMX1B è stata indagata nel contesto degli stati di linea cellulare nei tumori e del rimodellamento delle reti trascrizionali.
LMX1B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LMX1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LMX1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LMX1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LMX1B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.