Plásmido CRISPR de Activación (h) LMO4: sc-401636-ACT

LMO4 (LIM domain only 4) codifica una proteína adaptadora nuclear exclusiva de dominios LIM que ensambla complejos multiproteicos reguladores de la transcripción sin unirse directamente al ADN. Al servir de puente entre factores de transcripción y cofactores, LMO4 influye en decisiones de destino celular, programas de diferenciación y proliferación dependiente del contexto mediante la modulación de redes reguladoras génicas. Se ha implicado en procesos del desarrollo y en el patrón tisular, y la alteración de la expresión de LMO4 o de sus circuitos reguladores se ha asociado con un control transcripcional desregulado en múltiples contextos relevantes para enfermedad, incluida la biología del cáncer y fenotipos del neurodesarrollo. Como corregulador nodal, LMO4 se estudia con frecuencia por su papel en el ajuste fino de la transcripción sensible a vías de señalización y de las salidas de expresión génica dependientes de la cromatina.

LMO4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LMO4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LMO4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LMO4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LMO4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LMO4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LMO4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LMO4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LMO4 en células tumorales con expresión de LMO4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.