Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
LIS1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422102
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LIS1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico LIS1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LIS1 Antibody (H-7): sc-374586
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LIS1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422102 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pafah1b1 codifica LIS1, una proteina regolatoria che si lega alla dineina e che controlla il trasporto dipendente dai microtubuli, il posizionamento del centrosoma e l’organizzazione del fuso mitotico. Nelle cellule murine, LIS1 sostiene la proliferazione dei progenitori neuronali e la migrazione neuronale modulando la processività del complesso dineina–dinactina citoplasmatico e accoppiando il movimento dei carichi alla rete di microtubuli. Queste funzioni si integrano con i percorsi di rimodellamento del citoscheletro e di progressione del ciclo cellulare che definiscono l’architettura dei tessuti durante lo sviluppo. L’alterazione dei processi associati a LIS1 è collegata a fenotipi di neurosviluppo caratterizzati da una stratificazione corticale anomala e da un posizionamento neuronale compromesso.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LIS1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pafah1b1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pafah1b1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pafah1b1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LIS1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pafah1b1 per lo studio della segnalazione di LIS1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pafah1b1 critici per la funzione di LIS1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pafah1b1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal LIS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LIS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pafah1b1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal LIS1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LIS1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pafah1b1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pafah1b1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.