Lipin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418483-ACT

LPIN1 codifica la lipina-1, una fosfatidato fosfatasi dipendente da Mg2+ che catalizza la conversione dell’acido fosfatidico in diacilglicerolo, una tappa chiave nella biosintesi dei glicerolipidi e dei triacilgliceroli. Oltre al suo ruolo enzimatico, la lipina-1 influenza la dinamica delle goccioline lipidiche e coordina programmi trascrizionali che regolano l’ossidazione degli acidi grassi e il metabolismo mitocondriale attraverso interazioni con recettori nucleari e co-regolatori. L’attività di LPIN1 integra segnali nutrizionali e ormonali nei processi di differenziamento degli adipociti, nella gestione epatica dei lipidi e nelle vie di omeostasi energetica muscolare. La disregolazione di LPIN1 è stata collegata a fenotipi metabolici e ad anomalie di accumulo lipidico, e varianti umane sono associate a una maggiore suscettibilità a disturbi legati ai lipidi e a patologie metaboliche muscolari.

Lipin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LPIN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Lipin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LPIN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LPIN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Lipin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LPIN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Lipin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Lipin-1 nelle cellule tumorali con espressione di LPIN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.