Lipin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418483-ACT

LPIN1 codifica a lipina-1, uma fosfatase de ácido fosfatídico dependente de Mg2+ que catalisa a conversão de ácido fosfatídico em diacilglicerol, uma etapa-chave na biossíntese de glicerolipídios e triacilgliceróis. Além de sua função enzimática, a lipina-1 influencia a dinâmica das gotículas lipídicas e coordena programas transcricionais que controlam a oxidação de ácidos graxos e o metabolismo mitocondrial por meio de interações com receptores nucleares e co-reguladores. A atividade de LPIN1 integra sinais nutricionais e hormonais nas vias de diferenciação de adipócitos, processamento hepático de lipídios e homeostase energética muscular. A desregulação de LPIN1 tem sido associada a fenótipos metabólicos e anormalidades no armazenamento de lipídios, e variantes humanas estão associadas à suscetibilidade a distúrbios relacionados a lipídios e ao metabolismo muscular.

Lipin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LPIN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Lipin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LPIN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LPIN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Lipin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LPIN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Lipin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Lipin-1 em células tumorais com expressão de LPIN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.