LHR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400750-ACT

LHCGR は、ヒト黄体形成ホルモン／絨毛性ゴナドトロピン受容体（LHR）をコードしており、これはロドプシン様の G タンパク質共役型受容体（GPCR）で、黄体形成ホルモンおよび絨毛性ゴナドトロピンに結合して、性腺ステロイド産生や生殖組織の機能を調節します。リガンドが結合すると、LHR は主に Gαs–アデニル酸シクラーゼ–cAMP/PKA シグナル伝達を活性化し、さらに MAPK/ERK や PI3K/AKT 経路とも相互作用して、転写プログラム、細胞分化、内分泌フィードバックの調節に関与します。LHCGR の発現やシグナル伝達の異常は、生殖内分泌に関わる表現型（性腺機能の低下やステロイドホルモン生合成の変化など）と関連することが報告されています。生物医学研究では、LHCGR は GPCR シグナル伝達の動態、ゴナドトロピンによる遺伝子制御、ならびに生殖生物学やホルモン応答性システムに関連する経路間クロストークの解析に用いられます。

LHR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LHCGRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LHR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LHCGR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLHCGR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LHRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLHCGR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLHR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLHCGR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLHR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。