LGR6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401443-ACT

O LGR6 humano codifica um receptor acoplado à proteína G contendo repetições ricas em leucina, que funciona como receptor de alta afinidade para R-spondinas e potencializa a sinalização canônica Wnt/β-catenina. Ao intensificar programas transcricionais dirigidos por Wnt, o LGR6 contribui para a regulação da manutenção de células-tronco/progenitoras epiteliais, da homeostase tecidual e da dinâmica de diferenciação. A atividade do LGR6 cruza-se com vias que governam o controle do ciclo celular, a migração e respostas regenerativas, tornando-o um ponto útil para estudar a comunicação entre vias de sinalização no desenvolvimento e na remodelação. A desregulação da sinalização do eixo LGR6–R-spondina–Wnt tem sido associada à ativação de vias oncogênicas e a estados semelhantes aos de células-tronco alterados, sustentando a investigação do LGR6 na biologia do câncer e em fenótipos de sinalização relacionados.

LGR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LGR6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LGR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LGR6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LGR6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LGR6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LGR6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LGR6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LGR6 em células tumorais com expressão de LGR6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.