LEPROT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406321

Panoramica

LEPROT (leptin receptor overlapping transcript), noto anche come endospanina-1, è una proteina di membrana endosomiale che modula il traffico e l’abbondanza sulla superficie cellulare dei recettori delle citochine, con effetti particolarmente rilevanti su LEPR e sui relativi complessi di segnalazione. Regolando l’internalizzazione e il riciclo dei recettori, LEPROT può influenzare l’output della via di segnalazione JAK/STAT e, più in generale, il controllo della trasduzione del segnale a livello della membrana. Alterazioni dell’espressione di LEPROT sono state associate a fenotipi metabolici tramite effetti sulla risposta alla leptina e sull’omeostasi energetica. Il suo ruolo nello smistamento dei recettori lo rende inoltre rilevante per studi sulla segnalazione associata all’infiammazione e sul turnover recettoriale deregolato in contesti patologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LEPROT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LEPROT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LEPROT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LEPROT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LEPROT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LEPROT per lo studio della segnalazione di LEPROT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LEPROT critici per la funzione di LEPROT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LEPROT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LEPROT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LEPROT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LEPROT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LEPROT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LEPROT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LEPROT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LEPROT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.