LC3B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417828-ACT

MAP1LC3B は、微小管関連タンパク質1 light chain 3 beta（LC3B）をコードする。LC3B はユビキチン様修飾因子であり、切断および脂質化を受けて、形成途上のオートファゴソーム膜上で LC3-II となる。LC3B は SQSTM1/p62 などの LIR モチーフをもつカーゴ受容体に結合することで、選択的カーゴの隔離と、リソソーム分解経路におけるオートファゴソーム成熟を協調的に制御し、オートファジーの中核的な足場として機能する。このタンパク質は、MTOR や AMPK によって制御されるオートファジー開始を含む栄養・ストレスシグナルを統合し、オートファジーフラックスおよび小胞動態のモニタリングに日常的に用いられている。LC3B 関連オートファジーの制御異常は、神経変性、感染、がん細胞のストレス適応などの文脈で関与が示唆されており、プロテオスタシスやオルガネラ品質管理の機構研究を支えている。

LC3B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP1LC3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LC3B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP1LC3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP1LC3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LC3Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP1LC3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLC3B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP1LC3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLC3B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。