LATS1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401312-ACT

LATS1 (large tumor suppressor kinase 1) è una chinasi serina/treonina centrale nella via di segnalazione Hippo, che frena la proliferazione cellulare e promuove l’apoptosi fosforilando effettori chiave a valle come YAP/TAZ. Integrando segnali legati alla densità cellulare, alla polarità, alla segnalazione meccanica e agli input dei GPCR, LATS1 contribuisce a mantenere l’omeostasi tissutale limitando programmi trascrizionali che guidano la crescita e la transizione epitelio–mesenchimale. Un’attività deregolata di LATS1 o un’alterazione della via Hippo è frequentemente associata a inibizione da contatto compromessa, instabilità genomica e stati trascrizionali oncogenici in molteplici contesti tumorali. Nelle cellule umane, la funzione di LATS1 è anche collegata all’organizzazione del citoscheletro e al controllo del ciclo cellulare, rendendola un nodo utile per analizzare il cross-talk tra vie di segnalazione che modella proliferazione e differenziamento.

LATS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LATS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LATS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LATS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LATS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LATS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LATS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LATS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LATS1 nelle cellule tumorali con espressione di LATS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.