Latrophilin-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-408830-LAC

ADGRL1 codifica a latrofilina-1, um receptor acoplado à proteína G do tipo adesão (GPCR) que integra sinais de adesão extracelular com sinalização intracelular para regular o desenvolvimento de sinapses, o crescimento de neuritos e a formação de redes neuronais. Por meio de interações com ligantes endógenos e do acoplamento a proteínas G heterotriméricas, a latrofilina-1 influencia vias de segundos mensageiros e a remodelação do citoesqueleto que moldam a comunicação célula–célula. A sinalização associada ao ADGRL1 tem sido vinculada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações na conectividade sináptica, tornando-o relevante para o estudo dos mecanismos subjacentes à montagem de circuitos e à plasticidade funcional. Sua expressão e a sinalização mediada pelo receptor também oferecem um ponto de entrada acessível para dissecar a biologia de GPCRs de adesão em sistemas neurais humanos e em células modelo.

As Partículas de Ativação Lentivirais Latrophilin-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ADGRL1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Latrophilin-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ADGRL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Latrophilin-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ADGRL1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.