Partículas Lentivirales de Activación (h) LASP-1: sc-404630-LAC

LASP1 codifica la proteína 1 con dominios LIM y SH3 (LASP-1), un adaptador de adhesión focal con capacidad de unirse a la actina que se localiza en lamelipodios, fibras de estrés y uniones célula–célula para coordinar la remodelación del citoesqueleto. LASP-1 acopla la señalización en los complejos de adhesión con la dinámica de la actina, lo que influye en procesos como la migración celular, la formación de protrusiones de membrana y la mecanotransducción. A través de interacciones con proteínas como zyxin, VASP y componentes de la señalización de adhesiones focales, LASP-1 se vincula a vías que regulan el recambio de adhesiones y la motilidad. Se ha descrito una expresión desregulada de LASP1 en múltiples contextos tumorales y con frecuencia se investiga su papel en la invasión, fenotipos asociados a la metástasis y programas transcripcionales dependientes del citoesqueleto.

Las partículas de activación lentiviral LASP-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de LASP1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LASP-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción LASP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LASP-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo LASP1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.