LARP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-414019

Panoramica

La ribonucleoproteina associata al dominio La, membro della famiglia 4 (LARP4), è una proteina legante l’RNA che si associa alla proteina legante la poli(A) e regola la stabilità dell’mRNA e l’efficienza della traduzione nel citoplasma. Attraverso interazioni con complessi mRNP e con il macchinario di traduzione, LARP4 influenza la regolazione genica post-trascrizionale, incidendo sulla produzione proteica e sull’adattamento cellulare a segnali di crescita e di stress. Queste funzioni collegano LARP4 a vie che controllano proliferazione e migrazione cellulare, nonché la dinamica del citoscheletro, tramite cambiamenti a valle nel destino dei trascritti e nel controllo della traduzione. Un metabolismo dell’RNA e una traduzione deregolati sono caratteristiche ricorrenti in molti tumori e in contesti neuroevolutivi, rendendo LARP4 un nodo utile per studi meccanicistici su programmi di espressione genica rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LARP4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LARP4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LARP4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LARP4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LARP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LARP4 per lo studio della segnalazione di LARP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LARP4 critici per la funzione di LARP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LARP4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LARP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LARP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LARP4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LARP4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LARP4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LARP4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LARP4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.