Krs-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403632-ACT

STK4 codifica la chinasi serina/treonina Krs-2 (nota anche come MST1), un componente centrale della rete di segnalazione Hippo che integra segnali di stress per regolare proliferazione, apoptosi e omeostasi tissutale. Nelle cellule umane, l’attivazione di STK4 influenza cascate di chinasi e programmi trascrizionali, inclusa la modulazione dell’attività di YAP/TAZ e il crosstalk con MAPK e nodi di segnalazione legati al sistema immunitario. Krs-2 partecipa al controllo delle risposte allo stress ossidativo, della dinamica del citoscheletro e della funzione dei linfociti, collegandosi così alla fitness cellulare e alla regolazione dell’infiammazione. Alterazioni della segnalazione di STK4 sono state associate a un controllo della crescita deregolato e a disfunzioni immunitarie, rendendola rilevante per studi meccanicistici della biologia del cancro e di fenotipi immuno-correlati.

Krs-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STK4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Krs-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STK4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STK4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Krs-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STK4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Krs-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Krs-2 nelle cellule tumorali con espressione di STK4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.