kpm Plasmide Double Nickase (h): sc-404134-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- kpm Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il kpm Double Nickase Plasmid (h) e il kpm Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LATS2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: kpm Antibody (C-2): sc-515579
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
kpm Plasmide Double Nickase (h) | sc-404134-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
kpm Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404134-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LATS2 codifica una chinasi serina/treonina che funge da nodo tumor-soppressivo centrale nella via di segnalazione Hippo, fosforilando YAP/TAZ per limitarne l’attività nucleare e contenere programmi trascrizionali pro-proliferativi. Attraverso il crosstalk con il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi, la dinamica dei centrosomi e la regolazione del citoscheletro, LATS2 contribuisce all’inibizione da contatto e al mantenimento della stabilità genomica. Un’alterazione dell’attività di LATS2 o una disregolazione della via Hippo è associata a segnali di crescita aberranti e a fenotipi oncogenici in molteplici contesti tissutali. Di conseguenza, LATS2 è spesso oggetto di studio per i meccanismi che governano l’omeostasi tissutale, la meccanotrasduzione e la segnalazione dei checkpoint in risposta allo stress.
kpm Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LATS2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LATS2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LATS2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LATS2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.