KLHL9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433908

Panoramica

Klhl9 codifica la proteina murina KLHL9, un adattatore di substrato della famiglia BTB–BACK–Kelch che coopera con i complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina CUL3-RBX1 per promuovere l’ubiquitinazione e il turnover, dipendente dal proteasoma, di specifiche proteine bersaglio. Attraverso questo controllo della proteostasi mediato dall’ubiquitina, KLHL9 contribuisce alla regolazione del controllo di qualità proteico, di processi legati al ciclo cellulare e di output di segnalazione che dipendono dalla rimozione tempestiva dei substrati. L’alterazione degli adattatori CUL3–KLHL è ampiamente rilevante per la disregolazione delle vie dell’ubiquitina implicate nel neurosviluppo, nella biologia neuromuscolare e nel rimodellamento del proteoma associato al cancro, rendendo Klhl9 un nodo utile per studiare la specificità del sistema ubiquitina–proteasoma. Nei modelli murini, gli approcci di perdita di funzione consentono di analizzare come la selezione dei substrati dipendente da KLHL9 plasmi i fenotipi cellulari a valle in tessuti o tipi cellulari definiti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KLHL9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Klhl9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Klhl9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Klhl9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KLHL9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Klhl9 per lo studio della segnalazione di KLHL9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Klhl9 critici per la funzione di KLHL9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Klhl9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KLHL9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KLHL9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Klhl9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KLHL9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KLHL9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Klhl9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Klhl9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.