KLF6 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423861-ACT

Il gene murino Klf6 codifica il Krüppel-like factor 6 (KLF6), un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare programmi genici che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e il rimodellamento tissutale. KLF6 è integrato in reti di segnalazione e trascrizione sensibili allo stress, modulando in modo dipendente dal contesto processi quali la regolazione della matrice extracellulare, l’espressione di geni infiammatori e l’adattamento metabolico. Un’alterata attività di KLF6 è stata associata a proliferazione deregolata, rimodellamento correlato alla fibrosi e stati trascrizionali oncogenici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione genica in modelli di sviluppo e di malattia. Nei sistemi murini, la perturbazione di Klf6 viene spesso sfruttata per indagare il controllo trascrizionale dell’impegno di linea e delle risposte al danno nei compartimenti epiteliale, immunitario e stromale.

KLF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Klf6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KLF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Klf6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Klf6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KLF6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Klf6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KLF6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KLF6 nelle cellule tumorali con espressione di Klf6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.