KIR2.1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401974

Panoramica

KCNJ2 codifica il canale del potassio umano a rettificazione entrante Kir2.1, un determinante chiave del potenziale di membrana a riposo e dell’eccitabilità nel muscolo cardiaco e scheletrico. Kir2.1 conduce correnti IK1 che stabilizzano la ripolarizzazione terminale e modellano la forma del potenziale d’azione, integrandosi con i processi di traffico di membrana e di gating dipendente dal PIP2. Alterazioni della funzione di KCNJ2 sono collegate a fenotipi da canalopatia come la sindrome di Andersen–Tawil e possono influenzare la suscettibilità alle aritmie, la paralisi periodica e la segnalazione nello sviluppo dei tessuti eccitabili. Nei modelli cellulari, l’attività di Kir2.1 interseca l’omeostasi elettrofisiologica, la gestione del calcio e la regolazione dell’espressione genica dipendente dal potenziale di membrana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR2.1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNJ2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNJ2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNJ2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR2.1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNJ2 per lo studio della segnalazione di KIR2.1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNJ2 critici per la funzione di KIR2.1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNJ2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR2.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIR2.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNJ2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR2.1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIR2.1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNJ2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNJ2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.