KIR2.1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401974-ACT

KCNJ2 codifica a subunidade do canal de potássio retificador para dentro KIR2.1, um determinante-chave do potencial de membrana em repouso e da repolarização do potencial de ação em células excitáveis. Ao conduzir correntes IK1, o KIR2.1 estabiliza a excitabilidade da membrana e molda o comportamento eletrofisiológico no músculo cardíaco e esquelético, integrando-se a vias de homeostase iônica que acoplam a voltagem de membrana ao manuseio de cálcio e à contratilidade. A desregulação da atividade ou da expressão de KCNJ2 está associada a fenótipos hereditários de arritmia e disfunção neuromuscular, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de canalopatias e de sinalização elétrica. In vitro, a modulação dos níveis de KIR2.1 é comumente usada para investigar programas transcricionais dependentes do potencial de membrana, limiares de excitabilidade e interações em redes de canais iônicos.

KIR2.1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNJ2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIR2.1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNJ2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNJ2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIR2.1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNJ2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIR2.1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIR2.1 em células tumorais com expressão de KCNJ2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.