KCTD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412124

Panoramica

KCTD3 (potassium channel tetramerization domain containing 3) codifica una proteina contenente il dominio BTB/POZ, implicata in interazioni proteina–proteina che possono modellare l’assemblaggio di complessi multiproteici e influenzare la proteostasi. I membri della famiglia KCTD sono spesso collegati alla biologia delle ligasi dell’ubiquitina associate a cullina-3 (CUL3) e alla regolazione di intermedi di segnalazione tramite degradazione mirata, suggerendo ruoli nella modulazione delle vie di segnale e nell’omeostasi cellulare. Attraverso queste reti di interazione, KCTD3 è rilevante per studi sul controllo della crescita cellulare, sulle risposte allo stress e su programmi associati alla differenziazione in cui il rimodellamento dipendente dall’ubiquitinazione è prominente. La disregolazione di complessi incentrati su BTB/KCTD è stata associata a fenotipi rilevanti per la malattia in oncologia e in neurobiologia, supportando l’indagine di KCTD3 in modelli meccanicistici di segnalazione alterata e controllo di qualità proteico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCTD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCTD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCTD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCTD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCTD3 per lo studio della segnalazione di KCTD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCTD3 critici per la funzione di KCTD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCTD3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCTD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KCTD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCTD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCTD3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KCTD3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCTD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCTD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.