karyopherin β1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401230-NIC

KPNB1 codifica la carioferina β1 (importina-β1), un recettore fondamentale del trasporto nucleare che media l’importazione, dipendente da RanGTP, di proteine che presentano i segnali di localizzazione nucleare classici, in cooperazione con adattatori importina-α. Regolando il traffico nucleo-citoplasmatico di fattori di trascrizione, proteine della riparazione del DNA e regolatori del ciclo cellulare, KPNB1 influenza i programmi di espressione genica, il controllo dei checkpoint e la segnalazione responsiva allo stress. Questa via è parte integrante della progressione mitotica e della proteostasi, poiché l’importazione nucleare selettiva coordina replicazione, trascrizione e assemblaggio dei ribonucleoproteici. Alterazioni nelle dinamiche di trasporto nucleare e una deregolazione dell’attività di KPNB1 sono state associate a fenotipi proliferativi e di adattamento allo stress, rendendolo un bersaglio utile per studi sulla segnalazione oncogenica, il mantenimento del genoma e le interazioni ospite–patogeno.

karyopherin β1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KPNB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KPNB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KPNB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KPNB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.