ITM1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421187-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ITM1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ITM1 Double Nickase Plasmid (m) e il ITM1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Stt3a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ITM1 Antibody (A-2): sc-390227
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ITM1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ITM1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Stt3a** codifica una subunità catalitica del complesso oligosaccariltransferasi (OST), che media la glicosilazione N-linked co-traduzionale dei polipeptidi nascenti nel reticolo endoplasmatico. Trasferendo oligosaccaridi preassemblati su residui di asparagina all’interno del motivo consenso NXS/T, STT3A supporta il ripiegamento proteico, il controllo di qualità e il traffico intracellulare, e influenza l’omeostasi del RE e le reti di proteostasi. L’alterazione della glicosilazione dipendente da STT3A può rimodellare la risposta allo stress del RE, l’efficienza della via secretoria e la composizione delle glicoproteine di superficie, con conseguenze a valle per la segnalazione e il riconoscimento immunitario. La disregolazione della N-glicosilazione e della funzione dell’OST è di ampia rilevanza per studi sui disordini congeniti della glicosilazione, sullo stress metabolico e sul rimodellamento dei glicoproteomi associato al cancro, a supporto di ricerche meccanicistiche su vie legate alla malattia senza implicare utilità clinica.
ITM1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Stt3a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Stt3a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Stt3a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Stt3a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.