IP3R-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400986

Panoramica

ITPR1 codifica il recettore dell’inositolo 1,4,5-trisfosfato di tipo 1 (IP3R-I), un canale di rilascio di Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico che converte i segnali di IP₃ a valle di recettori accoppiati alla PLC in transitori di calcio citosolici e mitocondriali. Il flusso di Ca²⁺ mediato da IP3R-I regola l’accoppiamento eccitazione–trascrizione, la plasticità sinaptica, la secrezione e l’apoptosi, e si integra con vie quali la segnalazione GPCR/RTK–PLCβ/γ–IP₃, la calmodulina/CaMK, la calcineurina–NFAT e la comunicazione nei siti di contatto RE–mitocondrio. L’attività di ITPR1 modella l’omeostasi del calcio e le risposte allo stress, influenzando fenotipi cellulari che includono la scarica neuronale, l’autofagia e la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate. La variazione genetica o la disregolazione di ITPR1 è stata collegata a disfunzioni neurologiche, inclusi fenotipi di atassia spinocerebellare, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione del calcio nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ITPR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ITPR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ITPR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IP3R-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ITPR1 per lo studio della segnalazione di IP3R-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ITPR1 critici per la funzione di IP3R-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ITPR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IP3R-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IP3R-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ITPR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IP3R-I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IP3R-I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ITPR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ITPR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.