Partículas Lentivirales de Activación (h) Integrin αM/CD11b: sc-400563-LAC

ITGAM codifica la integrina αM (CD11b), que se heterodimeriza con la integrina β2 (CD18) para formar Mac-1/CR3, un importante receptor de adhesión y reconocimiento de patrones en células mieloides. CD11b regula la adhesión, la transmigración y la fagocitosis de los leucocitos al unirse a ligandos como las ICAM, iC3b y el fibrinógeno, y al coordinar la señalización “outside-in” con la remodelación del citoesqueleto. A través de la señalización por integrinas y la comunicación cruzada con el complemento y las vías de la inmunidad innata, ITGAM influye en los estados de activación inflamatoria, la producción de especies reactivas de oxígeno y la eliminación de dianas opsonizadas. La actividad y la expresión desreguladas de ITGAM se han implicado en la inflamación mediada por el sistema inmune y en la biología de las infecciones, por lo que es un marcador frecuente y un nodo mecanístico en estudios sobre la función de las células mieloides y la infiltración tisular.

Las partículas de activación lentiviral Integrin αM/CD11b (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ITGAM en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Integrin αM/CD11b (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ITGAM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Integrin αM/CD11b. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ITGAM y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.