Integrin αL/ITGAL/CD11a Double Nickase Plasmid (h): sc-402246-NIC

ITGAL kodiert Integrin αL (CD11a), das mit Integrin β2 (CD18) zu LFA-1 heterodimerisiert, einem Leukozyten-Adhäsionsrezeptor, der für das Trafficking von Immunzellen und Zell‑Zell‑Interaktionen essenziell ist. Die Bindung von LFA-1 an Liganden der ICAM-Familie steuert die feste Adhäsion, die transendotheliale Migration und die Bildung der immunologischen Synapse und koppelt extrazelluläre Signale an Zytoskelett‑Remodelling sowie Signalwege wie das Outside‑in‑Integrin‑Signaling, die Aktivierung von SRC‑Familien‑Kinasen und fokale Adhäsions-assoziierte Prozesse. Die ITGAL-Aktivität beeinflusst Aktivierungsschwellen von Lymphozyten, antigenabhängige Effektorfunktionen und die Koordination entzündlicher Antworten. Fehlregulierte LFA‑1–ICAM‑Interaktionen und veränderte ITGAL-Expression werden mit immunvermittelter Pathologie und Leukozyten‑Adhäsionsdefekten in Verbindung gebracht und stützen seine Nutzung in Studien zu Entzündung, Autoimmunität und Dynamiken im Tumor‑Immun‑Mikromilieu.

Integrin αL/ITGAL/CD11a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITGAL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITGAL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITGAL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITGAL-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.