Integrin αL/ITGAL/CD11a Double Nickaseプラスミド (h): sc-402246-NIC

ITGAL はインテグリンαL（CD11a）をコードしており、インテグリンβ2（CD18）とヘテロ二量体を形成して LFA-1 となります。LFA-1 は白血球の接着受容体で、免疫細胞の体内移動（トラフィッキング）や細胞間相互作用に必須です。LFA-1 が ICAM ファミリーのリガンドに結合することで、強固な接着、血管内皮通過（トランスエンドセリアル・マイグレーション）、免疫シナプスの形成が制御され、細胞外からの刺激が細胞骨格の再構築や、インテグリンのアウトサイドインシグナル、SRC ファミリーキナーゼの活性化、フォーカルアドヘージョン関連過程などのシグナル経路へと結び付けられます。ITGAL の活性は、リンパ球の活性化閾値、抗原依存的なエフェクター機能、炎症応答の協調にも影響します。LFA-1–ICAM 相互作用の破綻や ITGAL 発現の変化は、免疫介在性の病態や白血球接着異常に関与するとされ、炎症、自己免疫、腫瘍—免疫微小環境の動態研究における標的として有用です。

Integrin αL/ITGAL/CD11a ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGAL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGAL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGALの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGALが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。