Integrin αE/ITGAE/CD103 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404333-NIC

ITGAEはインテグリンαE（CD103）をコードしており、インテグリンβ7とヘテロ二量体を形成して、E-カドヘリンに結合し、上皮組織内でのリンパ球の滞留を支えるαEβ7接着受容体となります。この受容体は、細胞骨格のリモデリング、細胞移動、免疫シナプスのダイナミクスを協調させるインテグリンのアウトサイドイン・シグナル伝達に関与し、フォーカルアドヒージョン・キナーゼや、その下流のMAPKおよびPI3Kシグナル伝達を含む経路と連動します。CD103は組織常在性メモリーT細胞および一部の樹状細胞サブセットの代表的マーカーであり、粘膜における免疫監視や上皮バリアとの相互作用の形成に寄与します。ITGAE発現の変化やCD103陽性免疫細胞浸潤は、慢性炎症の状況や腫瘍免疫微小環境で広く研究されており、免疫細胞の局在化と機能の仕組みを理解する手がかりとなっています。

Integrin αE/ITGAE/CD103 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGAE 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGAE内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGAEの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGAEが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。