Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431434-ACT

Itgb4 はインテグリンβ4（ITGB4/CD104）をコードしており、主にインテグリンα6と対をなして α6β4 を形成する膜貫通型の接着受容体です。α6β4 は上皮の基底膜への付着における主要なラミニン受容体として機能します。ITGB4 はヘミデスモソームの組み立てや、フォーカルアドヒージョンおよび増殖因子シグナルとのクロストークを介して、細胞極性、遊走、生存に関わる経路（PI3K–AKT や MAPK シグナルなど）の協調制御に寄与します。ITGB4 の発現やシグナル伝達の変化は、上皮の完全性、浸潤性挙動、細胞外マトリックスのリモデリングの変化と関連しており、がん（癌腫）進展、創傷修復、炎症に伴う組織リモデリングの研究で重要な分子です。マウス系では、Itgb4 はオルガノタイプ培養や in vivo モデルにおいて、上皮—間質相互作用や接着依存的シグナル伝達ネットワークを解析するためにしばしば用いられます。

Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Itgb4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Itgb4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はItgb4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin β4/ITGB4/CD104の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のItgb4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin β4/ITGB4/CD104依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびItgb4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin β4/ITGB4/CD104経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。