Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400573-ACT

ITGB4はインテグリンβ4（CD104）をコードしており、これは膜貫通型の接着受容体で、通常はインテグリンα6と対を組んでα6β4を形成します。α6β4は、上皮細胞をラミニンに富む基底膜へ固定するヘミデスモソームの主要構成要素です。ITGB4は、中間径フィラメントとの連結や、フォーカルアドヒージョンおよび増殖因子シグナルとのクロストークを介して、上皮の極性、遊走、生存、メカノトランスダクションを制御し、PI3K–AKT、MAPK、細胞骨格リモデリングなどの経路に下流影響を及ぼします。ITGB4の発現量や局在の変化は、細胞—マトリックス接着の破綻、浸潤性の亢進、上皮バリアの再構築と関連しており、複数の疾患状況で示されています。α6β4は細胞外マトリックスからの情報を細胞内シグナルへ統合するため、接着依存性シグナル、EMT（上皮間葉転換）関連プログラム、腫瘍微小環境との相互作用の研究で広く扱われています。

Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGB4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGB4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGB4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin β4/ITGB4/CD104の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGB4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin β4/ITGB4/CD104依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGB4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin β4/ITGB4/CD104経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。