Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide Double Nickase (m): sc-421162-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickase Plasmid (m) e il Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Itga4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Integrin α4/ITGA4/CD49d Antibody (B-2): sc-376334
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide Double Nickase (m) | sc-421162-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Itga4* codifica l’integrina α4 (ITGA4/CD49d), un recettore di adesione che si associa con β1 o β7 per formare le integrine VLA-4 o α4β7, le quali regolano il traffico leucocitario, l’adesione stabile e la transmigrazione attraverso l’interazione con partner di legame quali VCAM1 e fibronectina. La segnalazione “outside-in” mediata da ITGA4 coordina il rimodellamento del citoscheletro e programmi di sopravvivenza tramite nodi di segnalazione delle adesioni focali, inclusi FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK, collegando l’interazione con la matrice extracellulare all’espressione genica e alla motilità. Nell’immunologia e nella biologia vascolare, le integrine α4 influenzano il reclutamento di cellule infiammatorie, l’homing delle cellule ematopoietiche e l’extravasazione tessuto-specifica, processi spesso studiati in modelli di autoimmunità, neuroinfiammazione e infiltrazione leucocitaria associata ai tumori. Un’attività di ITGA4 deregolata viene inoltre analizzata in contesti di infiammazione cronica e di formazione della nicchia metastatica, in cui dinamiche di adesione alterate modellano la localizzazione cellulare e il crosstalk con il microambiente.
Integrin α4/ITGA4/CD49d Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Itga4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Itga4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Itga4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Itga4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.