Integrin β2/ITGB2/CD18 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400921-NIC

O ITGB2 codifica a integrina β2 (CD18), uma subunidade de receptor de adesão restrita a leucócitos que se associa a cadeias α (por exemplo, ITGAL/CD11a, ITGAM/CD11b, ITGAX/CD11c) para formar integrinas β2 que controlam o tráfego de células imunes e suas funções efetoras. Esses heterodímeros regulam a adesão firme ao endotélio, a migração transendotelial e a formação da sinapse imunológica por meio de sinalização outside-in e inside-out, ligada à remodelação do citoesqueleto, à dinâmica de adesões focais e a vias associadas a MAPK/PI3K. Interações dependentes de CD18 com ligantes da família ICAM coordenam o recrutamento de neutrófilos e linfócitos durante a inflamação e modulam programas de fagocitose e de explosão oxidativa. Perturbações genéticas ou funcionais de ITGB2 estão associadas a defeitos de adesão leucocitária e a respostas inflamatórias alteradas, tornando-o um alvo-chave para o estudo de mecanismos de defesa do hospedeiro e de desregulação imune.

Integrin β2/ITGB2/CD18 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGB2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGB2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGB2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.