Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α2/ITGA2/CD49b: sc-400913-ACT

ITGA2 code l’intégrine α2 (CD49b), un récepteur d’adhésion qui s’associe à l’intégrine β1 pour former le complexe α2β1, un récepteur majeur du collagène et de la laminine dans de nombreux types de cellules épithéliales, endothéliales et immunitaires. En couplant l’engagement de la matrice extracellulaire à la signalisation intracellulaire, α2β1 régule l’assemblage des adhérences focales, le remodelage du cytosquelette et la mécanotransduction via des voies incluant FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK. L’activité d’ITGA2 influence la migration cellulaire, l’adhésion plaquettaire et le remodelage tissulaire, et une expression ou une fonction altérée a été associée à la fibrose, aux réponses inflammatoires et à l’invasion et aux métastases des cellules tumorales. En tant que récepteur de surface dont les effets de signalisation dépendent du contexte, ITGA2 est fréquemment étudié en biologie de la matrice extracellulaire, dans les interactions entre intégrines (crosstalk) et dans des modèles d’interactions cellule–matrice.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α2/ITGA2/CD49b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α2/ITGA2/CD49b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α2/ITGA2/CD49b dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.