Integrin β1/ITGB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421171-NIC

Il gene murino Itgb1 codifica l’integrina β1 (ITGB1), una subunità recettoriale chiave dell’adesione che forma eterodimeri con molteplici integrine α per mediare le interazioni tra cellula e matrice extracellulare. La segnalazione di ITGB1 coordina l’assemblaggio delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e la meccanotrasduzione attraverso vie che includono FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK, influenzando migrazione, proliferazione e sopravvivenza. Regolando la dinamica dell’adesione epiteliale e mesenchimale, ITGB1 è centrale per l’organizzazione dei tessuti, il traffico delle cellule immunitarie e la riparazione delle ferite. Un’attività di ITGB1 e una segnalazione dell’adesione deregolate sono ampiamente implicate nel rimodellamento infiammatorio e nell’invasione e metastatizzazione associate ai tumori, rendendo Itgb1 un bersaglio comune per studi funzionali di fenotipi dipendenti dall’adesione.

Integrin β1/ITGB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Itgb1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Itgb1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Itgb1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Itgb1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.