Partículas Lentivirales de Activación (h) IL-3Rα: sc-437304-LAC

IL3RA codifica la cadena alfa del receptor de interleucina‑3 (IL‑3Rα, CD123), una subunidad de unión al ligando que, junto con la cadena beta común, forma un complejo receptor de alta afinidad para mediar la señalización de IL‑3. La activación de IL‑3Rα desencadena las vías JAK/STAT, PI3K/AKT y MAPK aguas abajo, que regulan la proliferación, la supervivencia y la diferenciación en progenitores hematopoyéticos y linajes mieloides. La expresión de IL3RA ayuda a definir estados específicos de células inmunitarias y progenitoras, y se examina con frecuencia en estudios de mielopoyesis aberrante y hematopoyesis maligna. Como componente de un receptor de superficie, IL‑3Rα también se utiliza como una herramienta molecular para estudiar la respuesta a citocinas, las decisiones de destino celular y la reconfiguración de redes de señalización.

Las partículas de activación lentiviral IL-3Rα (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de IL3RA en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IL-3Rα (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción IL3RA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IL-3Rα. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo IL3RA y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.