Ikaros CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400530-ACT

IKZF1は、造血系の系譜決定と免疫細胞の分化を統括する亜鉛フィンガー型転写因子Ikarosをコードしており、B細胞の発生やT細胞の成熟において重要な役割を担います。Ikarosは制御配列に結合し、コリプレッサーやクロマチン再構成複合体と相互作用することで、クロマチンのアクセス性および長距離にわたる遺伝子発現プログラムを調節し、増殖、アポトーシス、サイトカインシグナル伝達を制御する転写ネットワークを形成します。IKZF1の活性や発現の異常は免疫調節異常や血液疾患の病態と関連しており、リンパ系の恒常性および分化状態を制御する経路における重要な要素として広く研究されています。

Ikaros CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IKZF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ikaros CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IKZF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIKZF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ikarosの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIKZF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIkaros依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIKZF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIkaros経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。