IFN-β Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418564-LAC

L’IFNB1 umano codifica l’interferone beta (IFN-β), un interferone di tipo I che avvia la segnalazione antivirale innata e modella le successive risposte immunitarie adattative. IFN-β si lega a IFNAR per attivare la fosforilazione di STAT1/STAT2 dipendente da JAK1/TYK2, formando ISGF3 con IRF9 e inducendo geni stimolati dall’interferone che regolano la restrizione virale, la presentazione dell’antigene e l’apoptosi. La sua trascrizione è innescata da vie dei recettori di riconoscimento dei pattern, come cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS e TLR3–TRIF, che convergono su IRF3/IRF7 e NF-κB. Una segnalazione di IFN-β deregolata è implicata nelle interferonopatie e nell’infiammazione autoimmune ed è ampiamente studiata nel contesto dell’infezione virale, dell’elusione immunitaria tumorale e del riconoscimento innato degli acidi nucleici.

Le particelle di attivazione lentivirale IFN-β (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IFNB1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IFN-β (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IFNB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IFN-β. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IFNB1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.