IFN-α5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421042

Panoramica

Ifna5 del topo codifica l’interferone‑α5 (IFN‑α5), un interferone di tipo I che coordina le difese antivirali innate e modella le successive risposte immunitarie adattative. IFN‑α5 segnala attraverso il complesso recettoriale IFNAR per attivare le vie JAK–STAT, inducendo geni stimolati dall’interferone che limitano la replicazione virale, modulano la presentazione dell’antigene e regolano i programmi di sopravvivenza cellulare. Questo asse citochinico influenza il tono infiammatorio nei tessuti e si interseca con la segnalazione dei recettori di riconoscimento del patogeno, incluse le vie RIG‑I/MAVS e cGAS–STING. Una segnalazione dell’interferone di tipo I deregolata è implicata nella suscettibilità alle infezioni e in fenotipi infiammatori immunomediati rilevanti per l’autoimmunità e per i microambienti immunitari tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifna5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifna5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifna5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFN-α5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifna5 per lo studio della segnalazione di IFN-α5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifna5 critici per la funzione di IFN-α5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifna5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFN-α5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFN-α5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifna5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFN-α5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFN-α5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifna5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifna5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.