IFN-α5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421042

Übersicht

Das murine Ifna5 kodiert Interferon‑α5 (IFN‑α5), ein Typ‑I‑Interferon, das angeborene antivirale Abwehrmechanismen koordiniert und nachgeschaltete adaptive Immunantworten prägt. IFN‑α5 signalisiert über den IFNAR‑Rezeptorkomplex und aktiviert JAK‑STAT‑Signalwege, wodurch interferonstimulierte Gene induziert werden, die die Virusreplikation einschränken, die Antigenpräsentation modulieren und Programme zur Regulation des Zellüberlebens steuern. Diese Zytokinachse beeinflusst den Entzündungsgrundton in Geweben und überschneidet sich mit der Signalgebung von Mustererkennungsrezeptoren, einschließlich der RIG‑I/MAVS‑ und cGAS‑STING‑Signalwege. Eine fehlregulierte Typ‑I‑Interferon‑Signalgebung wird mit erhöhter Infektionsanfälligkeit sowie mit immunvermittelten inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Autoimmunität und Tumor‑Immunmikroumgebungen relevant sind.

Das IFN-α5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ifna5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ifna5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ifna5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFN-α5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ifna5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFN-α5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ifna5-Exone abzielen, die für die IFN-α5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ifna5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFN-α5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IFN-α5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ifna5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFN-α5 HDR-Plasmid (m) und IFN-α5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ifna5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ifna5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.