IFI-44L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406752-ACT

IFI44L (proteína 44 semelhante induzida por interferon) codifica a IFI-44L, um produto gênico estimulado por interferon que é rapidamente induzido a jusante do interferon tipo I e da sinalização JAK/STAT durante respostas antivirais inatas. A expressão de IFI-44L é comumente usada como um indicador molecular do engajamento da via do interferon e está ligada a programas transcricionais que moldam as respostas celulares à infecção viral e a sinais inflamatórios. Expressão desregulada de IFI44L e metilação do promotor têm sido relatadas em diversas condições associadas ao interferon, incluindo assinaturas de doenças autoimunes sistêmicas e estados de ativação imune relacionados a infecções. Essas propriedades tornam IFI44L um alvo útil para estudar redes gênicas impulsionadas por interferon, ativação de células imunes e a biologia da resposta hospedeiro–patógeno.

IFI-44L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFI44L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFI-44L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFI44L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFI44L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFI-44L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFI44L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFI-44L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFI-44L em células tumorais com expressão de IFI44L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.