I830077J02Rik Double Nickaseプラスミド (m): sc-436641-NIC

マウス I830077J02Rik は、機能注釈が限られている十分に特徴づけられていないタンパク質をコードしており、トランスクリプトーム解析や比較ゲノミクス研究によって同定された候補制御因子として扱われることが多い遺伝子です。現時点の証拠から、その生物学的役割は状況依存的である可能性が示唆されており、転写制御、RNA 代謝、タンパク質恒常性といった基本的な細胞プロセスに関連して、細胞状態の遷移に影響を及ぼす可能性があります。そのため、発生、組織維持、ストレス応答を形作る遺伝子ネットワークを解明する上で、I830077J02Rik は注目されています。I830077J02Rik のような未解明座位の発現変動は、疾患関連の発現シグネチャーでしばしば観察されることから、関連するマウスモデルにおいて遺伝子型と表現型を結び付ける機構研究が動機付けられています。

I830077J02Rik ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における I830077J02Rik 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、I830077J02Rik内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、I830077J02Rikの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、I830077J02Rikが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。