HuC Plasmide Double Nickase (h): sc-400172-NIC

ELAVL3 (HuC) è una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni che riconosce elementi ricchi di AU nei trascritti bersaglio e regola l’espressione genica post-trascrizionale controllando la stabilità, la localizzazione e la traduzione dell’mRNA. Contribuisce alla differenziazione e al mantenimento neuronale modellando regoloni di RNA legati alla funzione sinaptica e alla dinamica del citoscheletro, e si integra con vie più ampie di processamento dell’RNA, inclusi lo splicing alternativo e la biologia dei granuli di RNA responsivi allo stress. L’alterazione dell’attività delle proteine neuronali leganti l’RNA e dei programmi trascrittomici a valle è spesso studiata nel contesto di meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi, in cui ELAVL3 funge da marcatore e nodo funzionale nella regolazione genica specifica dei neuroni. La ricerca su ELAVL3 nell’uomo esamina comunemente come il controllo dell’RNA dipendente da HuC influenzi la maturazione neuronale, l’eccitabilità e la vulnerabilità allo stress cellulare.

HuC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELAVL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELAVL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELAVL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELAVL3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.