Hrs Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437306

Panoramica

Hrs (substrato della tirosina chinasi regolata dal fattore di crescita degli epatociti; noto anche come HGS) è una proteina di smistamento endosomiale che agisce all’interno del complesso ESCRT-0 per riconoscere le proteine di membrana ubiquitinate e indirizzarne il traffico nei corpi multivescicolari, destinandole alla degradazione lisosomiale. Coordinando la maturazione degli endosomi e la downregolazione dei recettori, Hrs influenza gli output di segnalazione dei recettori tirosin-chinasici e di altri recettori di superficie, modulando vie che controllano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Questa proteina è parte integrante del turnover delle proteine di membrana, del trasporto endosoma‑lisosoma e della proteostasi, processi spesso analizzati in studi su neurodegenerazione, infiammazione e deregolazione della segnalazione oncogenica. Nei sistemi di ratto, l’alterazione di Hrs supporta la ricerca meccanicistica su come uno smistamento endosomiale modificato influenzi le decisioni sul destino dei recettori e la riorganizzazione delle vie a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hrs (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hrs.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di Hrs, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di Hrs
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hrs CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal Hrs CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hrs Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR Hrs (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.