HRI Plasmide Double Nickase (m): sc-420950-NIC

Il gene murino **Eif2ak1** codifica l’inibitore regolato dall’eme (HRI), una chinasi di eIF2α sensibile allo stress che attenua la traduzione globale fosforilando **EIF2S1** in condizioni di carenza di eme, stress ossidativo e stress proteotossico. HRI è un componente chiave della risposta integrata allo stress (ISR), coordinando la riprogrammazione della traduzione e programmi trascrizionali a valle, come l’adattamento guidato da **ATF4**, per ripristinare la proteostasi e l’equilibrio redox. Nelle cellule eritroidi, HRI contribuisce a collegare la disponibilità di eme alla sintesi delle globine e supporta la maturazione durante l’ematopoiesi, mentre in contesti più ampi mette in relazione il rilevamento dello stress con la funzione dei ribosomi e il controllo qualità delle proteine. Una segnalazione ISR deregolata e un controllo traduttivo aberrante che coinvolgono HRI sono stati associati a fenotipi correlati all’anemia e a un’inadeguata adattabilità allo stress in modelli pertinenti a processi infiammatori e neurodegenerativi.

HRI Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif2ak1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif2ak1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif2ak1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif2ak1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.