Plásmido Doble Nickase (m) HRI: sc-420950-NIC

El gen Eif2ak1 de ratón codifica el inhibidor regulado por hemo (HRI), una quinasa de eIF2α sensible al estrés que atenúa la traducción global al fosforilar EIF2S1 durante la deficiencia de hemo, el estrés oxidativo y el estrés proteotóxico. HRI es un componente clave de la respuesta integrada al estrés (ISR), ya que coordina la reprogramación de la traducción y programas transcripcionales posteriores, como la adaptación impulsada por ATF4, para restaurar la proteostasis y el equilibrio redox. En células eritroides, HRI ayuda a acoplar la disponibilidad de hemo con la síntesis de globina y favorece la maduración durante la hematopoyesis, mientras que en contextos más amplios vincula la detección del estrés con la función ribosomal y el control de calidad de las proteínas. La señalización de la ISR desregulada y el control traduccional aberrante que involucran a HRI se han asociado con fenotipos relacionados con la anemia y con una mala adaptación al estrés en modelos relevantes para procesos inflamatorios y neurodegenerativos.

HRI El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Eif2ak1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Eif2ak1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Eif2ak1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Eif2ak1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.