HRASLS2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412404-ACT

HRASLS2（HRAS-like suppressor 2、別名H-rev107-3）は、ホスホリパーゼA1/2活性およびアシルトランスフェラーゼ活性をもつ膜関連酵素をコードし、リン脂質組成を再構成して脂質介在性シグナル伝達に影響を与えます。脂肪酸の遊離やリン脂質代謝回転を制御することで、HRASLS2は膜動態、小胞輸送、ならびに増殖制御や分化に関連する細胞応答に影響し得ます。HRASLS2の発現変化は、がん遺伝子シグナル伝達ネットワークや脂質代謝のリプログラミングの文脈で研究されており、膜脂質恒常性の変化が増殖やストレス応答の経路を調節する可能性があります。Ras関連の細胞表現型との機能的なつながりから、腫瘍生物学、代謝、細胞状態遷移の機構研究において重要です。

HRASLS2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HRASLS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HRASLS2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HRASLS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHRASLS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HRASLS2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHRASLS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHRASLS2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHRASLS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHRASLS2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。