HoxB13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401878-ACT

HOXB13 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB13, un regolatore che si lega al DNA in modo specifico per la sequenza e che contribuisce a stabilire l’identità posizionale e i programmi di linea cellulare durante lo sviluppo embrionale e la differenziazione dei tessuti. Controllando reti trascrizionali che influenzano le decisioni sul destino cellulare, la maturazione epiteliale e la formazione degli organi, HoxB13 contribuisce a una regolazione della proliferazione e della differenziazione dipendente dal contesto. Un’espressione o una funzione deregolata di HOXB13 è stata collegata ad alterazioni dei programmi di espressione genica nei tessuti sensibili agli ormoni, con particolare rilevanza per la biologia della prostata e per stati trascrizionali associati al cancro. In quanto fattore di trascrizione nucleare, HoxB13 è ampiamente studiato per i suoi ruoli nelle vie di sviluppo e nei circuiti trascrizionali rilevanti per la patologia.

HoxB13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXB13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxB13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXB13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXB13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxB13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXB13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxB13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxB13 nelle cellule tumorali con espressione di HOXB13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.