HNF-1β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400537-ACT

HNF1B codifica il fattore di trascrizione HNF‑1β, un regolatore contenente un homeodominio essenziale per la differenziazione epiteliale e lo sviluppo degli organi, in particolare nelle linee cellulari di rene, pancreas e fegato. Controlla reti geniche coinvolte nel trasporto tubulare, nella polarità cellulare e nell’omeostasi metabolica, interfacciandosi con vie di segnalazione che determinano la segmentazione del nefrone e l’identità dell’epitelio duttale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di HNF1B sono associate ad anomalie dello sviluppo renale, fenotipi cistici e tubulo‑interstiziali e a una disregolazione del metabolismo del glucosio coerente con sindromi di diabete monogenico. In biologia dei tumori, HNF‑1β è spesso studiato come fattore di linea e di differenziazione nei tumori epiteliali, dove può influenzare programmi trascrizionali legati alla proliferazione e alle risposte allo stress.

HNF-1β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HNF1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HNF-1β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HNF1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HNF1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HNF-1β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HNF1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HNF-1β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HNF-1β nelle cellule tumorali con espressione di HNF1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.