HN1 Plasmide Double Nickase (h): sc-412133-NIC

HN1 (hematological and neurological expressed 1) codifica una piccola proteina conservata, implicata nella regolazione dei programmi di proliferazione e differenziamento cellulare, con un’espressione dinamica durante lo sviluppo e nei tessuti in rigenerazione. Nelle cellule umane, l’abbondanza di HN1 è stata associata al controllo del ciclo cellulare e a stati trascrizionali adattativi allo stress, ed è frequentemente studiata nel contesto di reti di segnalazione che influenzano la crescita e la plasticità di linea cellulare. Un’alterazione dell’espressione di HN1 è stata riportata in diversi tipi di tumore, dove viene utilizzata come correlato molecolare di fenotipi aggressivi e del rimodellamento delle vie proliferative. Queste caratteristiche rendono HN1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo della crescita, sullo switching fenotipico e sulla regolazione genica dipendente dal contesto.

HN1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.