Hmx3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420887

Panoramica

Hmx3 (proteina homeobox Hmx3) è un fattore di trascrizione che regola programmi di espressione genica dello sviluppo attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico e il controllo delle decisioni di destino cellulare. Nel topo, l’attività di Hmx3 è strettamente associata alla morfogenesi dell’orecchio interno e alla definizione dei pattern neuro-sviluppativi, coordinando reti trascrizionali a valle che modellano le strutture sensoriali e la differenziazione neuronale. L’alterazione dei circuiti regolatori guidati dai geni homeobox che coinvolgono Hmx3 può modificare il patterning embrionale e l’organogenesi, rendendolo rilevante per lo studio di fenotipi congeniti dello sviluppo e della logica di regolazione genica alla base della formazione dei sistemi sensoriali. In quanto regolatore nucleare, Hmx3 viene spesso studiato nel contesto del controllo trascrizionale, della specificazione di linea e del cross-talk tra vie di segnalazione dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hmx3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hmx3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hmx3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hmx3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hmx3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hmx3 per lo studio della segnalazione di Hmx3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hmx3 critici per la funzione di Hmx3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hmx3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hmx3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hmx3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hmx3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hmx3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hmx3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hmx3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hmx3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.