HMG-I/HMG-Y Plasmide Double Nickase (h): sc-402396-NIC

HMGA1 codifica le proteine architetturali associate alla cromatina HMG-I e HMG-Y, che si legano a sequenze di DNA ricche in AT per modulare l’organizzazione dei nucleosomi e la struttura della cromatina di ordine superiore. Facilitando l’assemblaggio dell’enhanceosoma e alterando la topologia del DNA, HMGA1 influenza programmi trascrizionali che regolano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la segnalazione in risposta allo stress, incluse vie legate alla regolazione dei geni infiammatori. Un’espressione e un’occupazione della cromatina da parte di HMGA1 deregolate sono state associate ad alterazioni della proliferazione e della stabilità del genoma in molteplici contesti patologici, rendendolo un nodo chiave negli studi sul rimodellamento oncogenico dei programmi trascrizionali. Nelle cellule umane, HMGA1 è inoltre implicato nella regolazione della tempistica di replicazione e nelle risposte al danno del DNA attraverso i suoi effetti sull’accessibilità della cromatina.

HMG-I/HMG-Y Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HMGA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HMGA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HMGA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HMGA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.