Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Plasmide Double Nickase (h): sc-400446-NIC

HDAC3 codifica l’istone deacetilasi 3, un’HDAC di classe I che catalizza la rimozione di gruppi acetile da proteine istoniche e non istoniche, regolando l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. HDAC3 opera in modo rilevante all’interno del complesso corepressore NCoR/SMRT, collegando il controllo epigenetico alla segnalazione dei recettori nucleari, alle risposte trascrizionali infiammatorie e alla regolazione dei geni metabolici. Coordinando la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e la differenziazione specifica di linea, HDAC3 contribuisce a mantenere l’identità cellulare e la stabilità del genoma. Un’attività o un’espressione disregolata di HDAC3 è stata implicata in stati trascrizionali oncogenici, in processi di neurosviluppo e neurodegenerativi e in patologie a guida immunitaria, rendendolo un bersaglio frequente negli studi di epigenetica meccanicistica.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HDAC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HDAC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HDAC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HDAC3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.